Forskellen mellem kloning og subkloning

Nøgleforskel - Kloning vs subkloning
 

Kloning og subkloning er molekylærbiologiske procedurer, der skaber genetisk identiske celler eller organismer, der bærer det DNA eller genet, der er af interesse. Kloning er en teknik, der involverer indsættelse af det interesserede gen eller DNA i en vektor, replikation af det i en værtsbakterie og produktion af celler eller organismer, som er nøjagtige kopier af den genetiske sammensætning. Subkloning er en teknik, der involverer indsættelse af genet af interesse, der allerede er indsat i en vektor, i en sekundær vektor, replikation af det i en værtsbakterie og produktion af genetisk identiske kopier af celler eller organismer. Den vigtigste forskel mellem kloning og subkloning er den, i kloning fortsætter genet af interesse, når det først er ligeret i en vektor, kloningsprocessen, medens det allerede klonede gen af ​​interesse adskilles fra modervektoren i subkloning og indsættes igen i en modtagervektor og fortsætter processen.

INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er kloning
3. Hvad er subkloning
4. Sammenligning side ved side - Kloning vs subkloning
5. Resume

Hvad er kloning?

Kloning er proceduren, der producerer genetisk identiske organismer eller celler. I naturen sker kloning i form af aseksuel reproduktion. Når der ikke er nogen genetisk rekombination eller ændring, modtager datterceller den samme genetiske sammensætning af forælderen. Prokaryotiske og eukaryote organismer skaber kloner ved binær fission, spiring, mitose osv. I molekylærbiologi er kloningsgener eller specifikke fragmenter af DNA en populær metode til at studere strukturen og funktionen af ​​den bestemte DNA-sektion.

Hovedformålet med molekylær kloning er at fremstille millioner af kopier af genetisk identiske celler eller organismer, der bærer DNA-fragmentet af interesse (hovedsageligt gener). Det skaber organismer med nøjagtige genetiske kopier af en anden. Primært klones specifikke gener i molekylære undersøgelser for at opnå strukturel og funktionel information og til DNA-sekventering. Til produktion af specifikke proteiner eller produkter i stor skala bruges kloning også vidt.

Kloningsprocedure

De grundlæggende trin i kloneproceduren er som følger.

1. Identifikation og isolering af genet af interesse. (Amplificering af genet af interesse ved PCR).
2. Begrænsningsfordøjelse af genet af interesse (Restriktionsendonuklease skærer genet).
3. Begrænsningsfordøjelse af vektor-DNA'et. (Vektor-DNA skæres også ved hjælp af den samme restriktionsendonuklease).
4. Indsættelse af genet i vektoren og dannelse af det rekombinante molekyle.
5. Transformation af den rekombinante vektor til en værtsbakterie.
6. Isolering og identifikation af de transformerede bakterier (plasmidvektor skal indeholde et selekterbart gen, mest almindeligt et antibiotisk resistensgen overfor screeningstransformerede bakterier).
7. Rekombinant genekspression i værten.

Figur_01: Kloningsprocedure

Hvad er subkloning?

Subkloning er en procedure til at flytte et gen af ​​interesse fra en vektor til en anden vektor for at se ekspressionen af ​​genet for at få den ønskede funktionalitet af genet. I denne metode er to vektorer involveret; nemlig forældervektor og destinationsvektor. Klonede indsatser flyttes igen ind i en anden vektor i subkloning. Målet med at overføre genet fra den første vektor til den anden vektor er at opnå noget, som ikke kunne gøres med den første vektor, eller at separere et gen igen i det allerede klonede fragment af DNA og udtrykke det alene. Restriktionsenzymer anvendes i denne procedure i begyndelsen.

Subkloning Procedure

De grundlæggende trin i subkloning er som følger.

1. Ved hjælp af restriktionsendonukleaser, separering af DNA'et af interesse i donorplasmidet (modervektor).
2. Amplifikation af DNA af interesse ved anvendelse af PCR.
3. Oprensning af PCR-produktet (DNA af interesse) ved gelelektroforese.
4. Åbning af modtagerplasmidet med samme restriktionsendonukleaser anvendt til at adskille DNA af interesse i moderplasmidet.
5. Ligering af DNA af interesse (gen) i modtagerplasmidet for at skabe det subklonede plasmid.
6. Transformation af den subklonede vektor til en kompetent værtsbakterie.
7. Screening af transformerede celler.
8. Oprensning af plasmid-DNA og anvendelse til DNA-sekventering eller ekspression af generne til opnåelse af de ønskede produkter.

Subkloning udføres ved lejligheder til isolering af et gen fra den klonede gruppe af gener, eller når genet af interesse kræves at overføres til et nyttigt plasmid for at se den nøjagtige funktion af genet af interesse.

Figur_02: Fremgangsmåde til kloning

Hvad er forskellen mellem kloning og subkloning?

Kloning vs subkloning
Kloning er proceduren, der producerer genetisk identiske organismer eller celler.	Subkloning er en procedure til at flytte et gen af ​​interesse fra en vektor til en anden vektor for at se ekspressionen af ​​genet for at få den ønskede funktionalitet af genet.
Behandle
Adskilt DNA af interesse fra organismen og indsat en gang i en vektor og klonet	Allerede klonet DNA separeres fra den første vektor og indsættes i en anden vektor og klones.
Indsæt bevægelse via vektorer
Flytter ikke indsatser (DNA af interesse) fra en vektor til en anden vektor.	Flyt indsatser fra overordnet vektor til destinationsvektor.

Resume - Kloning vs subkloning

Kloning skaber genetisk identiske celler eller organismer med det indsatte gen eller DNA af interesse. Det fortsætter gennem adskillelse og indsættelse af DNA'et af interesse i en vektor og ekspression i en værtsbakterie. Underkloning deler lignende trin med kloning. Imidlertid indsættes allerede klonet DNA-fragment (gen af ​​interesse) i subkloning i en vektor og transformeres til en værtsbakterie. Det er den vigtigste forskel mellem kloning og subkloning.

Referencer

1. Lodish, Harvey. "DNA-kloning med plasmidvektorer." Molekylær cellebiologi. 4. udgave. U.S. National Library of Medicine, 1. januar 1970. Web. 5. mar. 2017
2. ”Subkloning.” Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14. februar 2017. Web. 06 mar. 2017
3. ”Subkloning.” Underkloning | Open Access-artikler | Open Access-tidsskrifter | Konferenceprocedurer | Redaktører | Forfattere | Anmeldere | videnskabelige begivenheder. N.p., n.d. Web. 06 mar. 2017
4. Wackerhage, Henning. “Sådan subkloneres.” Sådan subkloneres. N.p., 1. januar 1970. Web. 06 mar. 2017

Billede høflighed

1. Molekylær kloningsprocedure - Af CNX OpenStax [CC BY 4.0], via Wikimedia Commons
2. Subkloning Procedure - Efter den originale uploader var Takometer på engelsk Wikipedia (Overført fra en.wikipedia til Commons.) [CC BY 2.5], via Wikimedia Commons