Forskel mellem direkte og indirekte immunfluorescens

Det vigtigste forskel mellem direkte og indirekte immunofluorescens er, at direkte immunofluorescens bruger et enkelt antistof, der virker mod målet af interesse, mens den indirekte immunofluorescens bruger to antistoffer til at mærke målet af interesse.

Immunfluorescens eller celleafbildning er en teknik, der bruges til at mærke et specifikt målantigen med en fluorofor. Her er fluoroforen en fluorescerende kemisk forbindelse, der kan udsende lys ved lyscititation. Når en fluorophore binder med målantigenet, tillader det påvisning af målmolekylet i prøven. For at beskrive det yderligere, når et antigen binder med et specifikt antistof, kan det konjugeres med fluoroforer. Derfor er det let at påvise tilstedeværelsen af ​​målantigenet i prøven, når man observerer under fluorescensmikroskop.

Derudover er der to typer immunofluorescens; direkte og indirekte immunfluorescens. Forskellen mellem direkte og indirekte immunofluorescens ligger hovedsageligt i antallet af anvendte antistoffer og fluorofor-konjugering. Det vil sige i direkte immunofluorescens konjugeret fluoroforen direkte til det primære antistof, mens fluorofor-konjugatet i indirekte immunofluorescens er med det sekundære antistof.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er direkte immunfluorescens
3. Hvad er indirekte immunfluorescens
4. Ligheder mellem direkte og indirekte immunfluorescens
5. Sammenligning side ved side - Direkte vs indirekte immunfluorescens i tabelform
6. Resume

Hvad er direkte immunfluorescens?

Immunofluorescens bruger antistoffer til at detektere specifikke målantigener. Direkte immunofluorescens er en af ​​de to typer immunofluorescens. I direkte immunofluorescens involverer et enkelt antistof (primært antistof), og fluoroforen konjugerer direkte med det primære antistof. Efter binding af antistoffet med målantigenet udsender fluorophore fluorescens, som kan påvises ved hjælp af et fluorescensmikroskop.

Figur 01: Direkte immunfluorescens

Imidlertid er direkte immunofluorescens en dyr metode, da de primære konjugerede antistoffer er dyre sammenlignet med de sekundære antistoffer. Ikke desto mindre involverer det ikke et ekstra trin, derfor en kortere teknik. Endvidere reduceres ikke-specifikke bindinger i direkte immunofluorescens. Derfor er arternes krydsreaktivitet lav. Men ved påvisning er følsomheden af ​​den direkte immunofluorescens svag i sammenligning med den indirekte immunofluorescens .

Hvad er indirekte immunfluorescens?

Indirekte immunofluorescens er den anden type immunofluorescens, der involverer to typer antistoffer, såsom primære og sekundære antistoffer i mærkningen af ​​målantigenet. I denne metode konjugeres fluorophoren med det sekundære antistof. Derfor indebærer denne teknik et yderligere trin.

Figur 02: Immunofluorescens

Imidlertid er følsomheden høj ved denne metode, da flere fluoroforer kan konjugeres til sekundære antistoffer, og det gør detekteringen lettere. Endvidere er indirekte immunofluorescens billigere på grund af det faktum, at konjugeringen af ​​sekundære antistoffer er billigere og lettere. I sammenligning med den direkte immunofluorescens er arterens krydsreaktivitet høj ved den indirekte metode.

Hvad er ligheden mellem direkte og indirekte immunfluorescens?

• De er to typer immunofluorescens-teknik.
• Primære antistoffer og fluorofor involverer i begge metoder.
• Antigen-antistofreaktionen forekommer også i begge metoder.
• Endvidere anvender både direkte og indirekte immunofluorescens et fluorescensmikroskop til påvisning af antigen.

Hvad er forskellen mellem direkte og indirekte immunfluorescens?

Immunofluorescens kan være direkte eller indirekte baseret på fluorophore-konjugering med de anvendte antistoffer. I direkte immunofluorescens konjugerer fluoroforen med det primære antistof, som er det enkelte antistof, der involverer i denne teknik. I modsætning hertil konjugeres fluoroforen i indirekte immunofluorescens med det sekundære antistof, som er en af ​​de to typer antistoffer, der involverer teknikken. Derfor er den største forskel mellem direkte og indirekte immunofluorescens antistoftypen, der konjugeres med fluoroforen.

Den følgende infographic tilvejebringer en side ved side-sammenligning af forskellen mellem direkte og indirekte immunofluorescens.

Resume - Direkte vs indirekte immunfluorescens

Immunofluorescens er en teknik, der bruges til at detektere tilstedeværelsen af ​​specifikke antigener i en prøve. Denne teknik bruger specifikke antistoffer. I dette konjugerer antistofferne derfor med fluoroforer for at detektere dem under anvendelse af et fluorescerende mikroskop. Der er endvidere to typer immunofluorescens, nemlig direkte og indirekte immunofluorescens. Direkte immunofluorescens involverer et enkelt antistof og fluorophore direkte konjugeret til dette antistof. Indirekte immunofluorescens involverer to antistoffer; primært og sekundært og fluorophore konjugeret til det sekundære antistof. Da flere sekundære antistoffer kan binde med et primært antistof, og flere fluoroforer kan konjugere med sekundære antistoffer, er indirekte immunofluorescens en mere følsom metode end den direkte metode. Desuden er den indirekte metode billigere end den direkte metode. Dette er således forskellen mellem direkte og indirekte immunofluorescens.

Reference:

1. ”Immunofluorescens.” Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19. august 2018. Tilgængelig her 

Billede høflighed:

1. ”HSP IF IgA” Af Emmanuelm på en.wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. ”Immunofluorescence” af Westhayl618 - Eget arbejde, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia