Forskel mellem gelelektroforese og SDS-side

Nøgleforskel - Gelelektroforese vs SDS-side
 

Gelelektroforese er en teknik, der adskiller makromolekyler i et elektrisk felt. Det er en almindelig metode i molekylærbiologi til at adskille DNA, RNA og proteiner fra blandinger i henhold til deres molekylære størrelser. SDS Page er en type gelelektroforese, der bruges til at adskille proteiner fra en proteinblanding baseret på deres størrelser. Gelelektroforese er et udtryk der bruges til at henvise til den normale teknik anvendt til DNA, RNA og proteinseparation mens SDS-side er en type gelelektroforese. Dette er den vigtigste forskel mellem gelelektroforese og SDS-side.

INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er gelelektroforese
3. Hvad er SDS-side
4. Sammenligning side ved side - Gelelektroforese vs SDS-side
5. Resume

Hvad er gelelektroforese?

Gelelektroforese er en almindelig teknik, der anvendes i laboratorier til at adskille ladede molekyler såsom DNA, RNA, proteiner osv. Fra deres blandinger. En gel anvendes til gelelektroforese. Det fungerer som en molekylsigt. Der er to typer geler anvendt til gelelektroforese, nemlig agarose og polyacrylamid. Valg af en gel- og gelpræparat er vigtige faktorer, der skal overvejes i gelelektroforeserne, da porestørrelsen af ​​gelen skal omhyggeligt manipuleres for en god adskillelse af molekyler gennem gelelektroforese. Gelelektroforese har et elektrisk felt forbundet til to ender af gelen. Den ene ende af gelen viser en positiv ladning, mens den anden ende er negativt ladet.

DNA og RNA er negativt ladede molekyler. Når de først er fyldt i gelen fra den negative ende af gelen og påført det elektriske felt, vandrer de gennem gelporerne mod den positivt ladede ende af gelen. Migrationshastigheden afhænger af ladningen og molekylets størrelse. Mindre molekyler vandrer let gennem geleporerne end større molekyler. Derfor rejser mindre molekyler en lang afstand gennem gelen, og de større molekyler rejser en kort afstand. For at observere bevægelse af molekyler på gelen bruges specielle typer farvestoffer. Det elektriske felt anvendes i en bestemt periode og stoppes for at forhindre tab af molekyler og for at holde molekylerne på deres rejste position. Forskellige bånd kan observeres i gelen. Disse bånd repræsenterer molekylerne i forskellige størrelser. Derfor er gelelektroforese nyttigt til at differentiere molekyler i henhold til deres størrelser.

Gelelektroforese er inkorporeret i forskellige teknikker som en præparativ teknik i molekylærbiologi, såsom PCR, RFLP, kloning, DNA-sekventering, sydlig blotting, genomkortlægning osv..

Figur 01: Agarosegelelektroforese

Hvad er SDS-side?

Natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-side) er en type gelelektroforese, der bruges til at adskille proteiner. Når gelelektroforese bruges til at adskille proteiner, er der behov for særlige behandlinger, da proteiner ikke er negativt ladede som DNA og RNA og ikke migrerer mod den positive ende eller den negative ende. Derfor denatureres proteiner og coates med en negativ ladning inden gelelektroforese. Det gøres ved hjælp af et vaskemiddel kaldet natriumdodecylsulfat (SDS). Gelelektroforese, der bruger SDS og en polyacrylamidgel til det bærende medium er kendt som SDS Page. Denne teknik er almindeligt anvendt inden for biokemi, genetik, kriminalteknologi og molekylærbiologi.

Under SDS-side blandes proteiner med SDS. SDS udfolder proteiner til en lineær form og belægger dem med en negativ ladning, der er proportional med deres molekylmasse. På grund af den negative ladning, migrerer proteinmolekyler mod den positive ladningsende af gelen og adskilles i henhold til deres molekylmasser. På SDS-side bruges polyacrylamid som den faste bærer til gelen. Den faktiske adskillelse af proteinerne afhænger hovedsageligt af gelens egenskaber. Derfor bør polyacrylamidgelpræparat udføres omhyggeligt, og korrekte koncentrationer af polyacrylamid bør anvendes. Polyacrylamidgeler viser høj opløsning end agarosegeler. Derfor betragtes SDS-side som en højopløsnings-teknik til proteinseparation.

SDS-side er en type denaturerende gelelektroforese. Det har en stor begrænsning i proteinanalyse. Da SDS denaturerer proteiner inden adskillelse, tillader det ikke påvisning af enzymatisk aktivitet, proteinbindingsinteraktioner, proteinkofaktorer osv..

Figur 02: SDS-side

Hvad er forskellen mellem gelelektroforese og SDS-side?

Gelelektroforese vs SDS-side
Gelelektroforese er en metode, der udføres til at adskille makromolekyler ved hjælp af et elektrisk felt.	SDS Page er en gel-elektroforese-teknik i høj opløsning, der bruges til at adskille proteiner baseret på deres masse.
Gel Run
Det kan udføres på vandret eller lodret måde.	SDS-side kører altid lodret.
Grundlag for adskillelse
Adskillelse sker i henhold til opladning og størrelse.	Proteinseparation sker i henhold til masse og ladning.
Løsning
Agarosegelelektroforese har lav opløsning og polyacrylamidgelelektroforese har en højere opløsning	SDS-side har en bedre opløsning.
denaturering
Gelelektroforese inkluderer både denaturerende og ikke-denaturerende teknikker.	SDS-side denaturerer proteiner inden adskillelse.

Resume - Gelelektroforese vs SDS-side

Gelelektroforese er en almindelig teknik, der anvendes til separering og analyse af DNA, RNA og proteiner baseret på deres størrelse og ladning. Der er to hovedtyper af gelelektroforese, nemlig agarosegelelektroforese og polyacrylamidgelelektroforese. Agarosegeler bruges hovedsageligt til nukleinsyreseparation; når der kræves højere opløsning, anvendes polyacrylamidgeler. SDS Page er en type gelelektroforese, der ofte bruges til at adskille komplekse blandinger af proteiner. Det betragtes som en højopløselig proteinseparationsteknik. Dette er forskellen mellem gelelektroforese og SDS-side.

Referencer:
1. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig, og David H. Petering. “Indfødt SDS-PAGE: Elektroforetisk separering af proteiner i høj opløsning med opretholdelse af indfødte egenskaber inklusive bundne metalioner. www.ncbi.nlm.nih.gov. N.p., maj 2014. Web. 7. april 2017
2. Stellwagen, Nancy C. "Elektroforese af DNA i agarosegeler, polyacrylamidgeler og i fri opløsning." Elektroforese. U.S. National Library of Medicine, juni 2009. Web. 7. april 2017

Billede høflighed:
1. “Gelelektrophoreseapparatur” (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2. “DNA Agarose gel elektroforese” af School of Natural Resources fra Ann Arbor - DNA lab (CC BY 2.0) via Commons Wikimedia