Forskel mellem RP HPLC og HIC

Det vigtigste forskel mellem RP HPLC og HIC er det RP HPLC bruger en mere polær mobil fase og en mindre polær stationær fase. Mens HIC bruger en hydrofob stationær fase, der tillader de hydrofobe molekyler at fastgøre til den.

Kromatografi er en analytisk teknik, der hjælper med at adskille en blanding i dens komponenter. Først skal vi opløse prøven, der skal adskilles i en opløsning. Denne opløsning-stofblanding kaldes den mobile fase. Derefter føres den mobile fase gennem et andet materiale, der kaldes den stationære fase. Den stationære fase bestemmer separationen af ​​komponenterne. Adskillelsen sker på grund af opdelingen af ​​materiale mellem mobilfasen og den stationære fase.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er RP HPLC
3. Hvad er HIC
4. Sammenligning side ved side - RP HPLC vs. HIC i tabelform
5. Resume

Hvad er RP HPLC?

Udtrykket RP HPLC står for Omvendt fase High-Performance Liquid Chromatography. Det involverer adskillelse af komponenter i en blanding i henhold til hydrofobicitet. De hydrofobe komponenter i den mobile fase forbinder med de immobiliserede hydrofobe ligander på den stationære fase, mens hydrofile komponenter eluerer gennem den stationære fase uden at blive bundet til overfladen af ​​den stationære fase.

Figur 01: HPLC-apparat

Desuden har denne metode mere reproducerbarhed sammenlignet med andre kromatografiske teknikker, og den viser også bred anvendelse. Derfor bruger vi denne metode i laboratorier til over 75% af alle HPLC-metoder. Det meste af tiden bruger vi en vandig blanding af vand med et blandbart polært organisk opløsningsmiddel som den mobile fase. Det vil således sikre fastgørelsen af ​​de hydrofobe komponenter i opløsningen til overfladen af ​​den stationære fase.

Hvad er HIC?

Udtrykket HIC står for Hydrofob interaktionskromatografi. Det er en type revers fase HPLC, og denne metode bruges hovedsageligt til adskillelse af store biomolekyler, såsom proteiner. I denne metode er vi nødt til at bruge et vandigt medium til at fremstille prøven af ​​biomolekylet. Det skyldes, at organiske opløsningsmidler kan forårsage denaturering af proteinerne. Desuden bruger denne teknik interaktionen mellem store molekyler med en let hydrofob overflade af den stationære fase. Desuden skal vi bruge en høj saltkoncentration i prøven, fordi det tilskynder proteinet til at blive tilbageholdt på pakningen; denne proces kaldes saltning. Ved gradvist at sænke saltkoncentrationen kan vi få biomolekylerne til at elueres separat i henhold til deres hydrofobicitet.

Normalt bruger denne metode betingelserne modsat dem for ionbytningskromatografi. I denne teknik skal vi først føre en bufferopløsning gennem søjlen for at reducere opløsningen af ​​opløst stof i prøven. Det får de hydrofobe regioner i proteinet til at udsættes. Når molekylet imidlertid er mere hydrofobt, kræves der mindre salt for at fremme bindingen. Her elueres de mindre hydrofobe opløsninger først, og ifølge ændringen i saltkoncentration elueres mere hydrofobe opløste stoffer sidst.

Hvad er forskellen mellem RP HPLC og HIC?

Kromatografi er en analytisk teknik til adskillelse af komponenter i en blanding. RP HPLC og HIC er to specialiserede kromatografiske teknikker. Den vigtigste forskel mellem RP HPLC og HIC er, at RP HPLC bruger en mere polær mobil fase og mindre polær stationær fase, hvorimod HIC bruger en hydrofob stationær fase, som tillader de hydrofobe molekyler at fastgøre på den.

Nedenstående infografisk opsummerer forskellen mellem RP HPLC og HIC.

Resume - RP HPLC vs. HIC

Kromatografi er en analytisk teknik til adskillelse af komponenter i en blanding. RP HPLC og HIC er to specialiserede kromatografiske teknikker. Den vigtigste forskel mellem RP HPLC og HIC er, at RP HPLC bruger en mere polær mobil fase og en mindre polær stationær fase, hvorimod HIC bruger en hydrofob stationær fase, som tillader de hydrofobe molekyler at binde sig til den.

Reference:

1. "HPLC-separationstilstande." Vand, tilgængelig her.

Billede høflighed:

1. “Forberedende HPLC” Af GYassineMrabetTalk & # x2709; Dette W3C-uspecificerede vektorbillede blev oprettet med Inkscape. - Eget arbejde (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia