Forskel mellem kortvarig og stabil transfektion
Share
Nøgleforskel - Transient vs Stable Transfection
Transfektion er en proces, der er involveret i genoverførslen af eukaryote celler ved anvendelse af kemiske eller fysiske metoder. Transfektion kan klassificeres i to hovedtyper med navnet transient transfektion og stabil transfektion. Under kortvarig transfektion mislykkes genet af interesse i at integreres med værtsgenomet og udtrykkes midlertidigt inden for vært på kort sigt, hvorimod genet af interesse integreres i værtsgenomet i stabil transfektion og opretholdes i lang tid i adskillige generationers. Dette er den vigtigste forskel mellem kortvarig og stabil transfektion. I begge tilfælde er transfektion succesfuld, og gener udtrykkes.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er kortvarig transfektion
3. Hvad er stabil transfektion
4. Sammenligning side ved side - Forbigående vs stabil transfektion
5. Resume
Hvad er kortvarig transfektion?
Transfektion er et vigtigt værktøj til indsættelse af gener i eukaryote celler. Blandt de to typer transfektion er kortvarig transfektion en almindelig måde i genoverførsel. Gennem en vektor transformeres fremmede gener inde i værtsceller. Når fremmed DNA kommer ind i værtscellen, har det to muligheder. Det kan enten integreres med værtsgenomet og replikere, eller forblive indeni uden at integrere sig i genomet. Forbigående transfektion udviser den midlertidige ekspression af de indsatte gener uden at blive integreret i værtsgenomet. Gener udtrykker og producerer det kodede protein, indtil cellen deler sig. På grund af manglende integration kan den ikke replikere og indgå i fremtidige generationer. Denne type transfektion er vellykket i en kort periode. Under celledelingen eller på grund af nogle andre faktorer udsættes fremmed DNA for nedbrydning. Forbigående transfektion vises, når det fremmede DNA er i form af stærkt opviklet DNA.
Figur 01: Forbigående transfektion
Hvad er stabil transfektion?
Stabil transfektion viser vellykket udenlandsk genintegration i værtsgenomet. Når fremmed DNA kommer ind i værtscellen, integreres en del af det fremmede DNA med værtsgenomet og bliver en del af det. Derfor gentages fremmed DNA også og overgår til kommende generationer, når værtsgenomet replikeres. Denne type transfektion er kompleks og sjælden. På grund af den stabile transfektion i genomet opretholdes denne egenskab imidlertid i en længere periode på flere generationer.
Stabil transfektion er en vanskelig proces og kræver en effektiv levering af DNA og celleindsamling af det fremmede DNA i dets genom. Derfor favoriserer lineært DNA den stabile transfektion end cirkulært DNA. Imidlertid er stabil transfektionshastighed cirka en ud af 104 transformerede celler. Stabil transfektion kan observeres ved cotransfomation af en selekterbar markør og udførelse af den kunstige selektion på et medium.
Figur 02: Stabil transfektion
Hvad er forskellen mellem transient og stabil transfektion?
Forbigående vs stabil transfektion | |
| Fremmed DNA integreres ikke i et værtsgenom. | Udenlandsk DNA integreres med værtsgenomet og bliver en del af det. |
| Replikering i værten | |
| Forbigående transficerede gener replikeres ikke i værten. Derfor overføres gener ikke til næste generationer. | Gener replikeres i værten og overføres til kommende generationer. |
| Tidsvarighed af genekspressionen | |
| Gener udtrykkes i en begrænset periode, og derefter ødelægges de. | Gener bliver en del af genomet og udtrykkes i generationen i en lang periode. |
| Brug | |
| Dette er nyttigt til at undersøge virkningerne af kortvarig ekspression af gener eller genprodukter. | Dette er nyttigt til at undersøge virkningerne af genudtryk på lang sigt. |
| Registrering af transfektionen | |
| Gener udtrykkes og kan let detekteres ved indsættelse af et reportergen. | Stabil transfektion kan let detekteres ved at indsætte en selekterbar markør og vælge gennem kunstigt valg på medier. |
| Forekomst og proces | |
| Forbigående transfektion er almindelig og ikke kompleks at udføre. | Stabil transfektion er sjældent i forekomst og kompliceret at udføre. |
| DNA's art | |
| Meget supercoiled DNA er egnet til transient transfektion. | Lineært DNA er egnede til stabil transfektion. |
| Applikationer | |
| Dette bruges til undersøgelser af gen knockdown eller lyddæmpning med hæmmende RNA'er, proteinproduktion i mindre skala | Dette bruges til proteinproduktion i en større farmakologistudie i større målestok, genterapi, forskning på mekanismerne til langvarig genetisk regulering |
Resume - Forbigående vs stabil transfektion
Forbigående og stabile transfektioner er to typer transfektioner vist under genoverførslen til eukaryote celler ved ikke-viralbaserede systemer. Transformeret fremmed DNA er ikke integreret med værtsgenomet i kortvarig transfektion, medens det integreres med værtsgenomet i stabil transfektion. Cirkulært opviklet DNA vises transient transfektion, hvorimod lineær DNA foretrækker stabil transfektion. Dette er forskellen mellem kortvarig og stabil transfektion. Imidlertid er kortvarig transfektion mere almindelig og let sammenlignet med stabil transfektion. Men udvælgelsen af en blandt to afhænger af formålet med genoverførslen og forskningsprojektets varighed.
Referencer:
1. Condreay, J. Patrick, Sam M. Witherspoon, William C. Clay og Thomas A. Kost. "Forbigående og stabil genekspression i pattedyrceller transduceret med en rekombinant baculovirusvektor." Forløb fra Det Nationale Akademi for Videnskaber i Amerikas Forenede Stater. National Academy of Sciences, 5. januar 1999. Web. 25 mar. 2017
2. Kim, Tae Kyung og James H. Eberwine. "Pattedyrcelletransfektion: nutiden og fremtiden." Analytisk og bioanalytisk kemi. Springer-Verlag, august 2010. Web. 25 mar. 2017
