Forskellen mellem direkte og indirekte ELISA

Nøgleforskel - Direkte kontra indirekte ELISA

En enzymbundet immunoassay (ELISA), også kendt som enzymimmunoassay, er en serologisk test, der detekterer antistoffer i blodet. Det bruges som et diagnostisk værktøj til at finde ud af, om patienten er blevet udsat for en bestemt type virus eller et andet infektiøst middel (antigen), og om kroppen har produceret antistoffer mod infektionen. ELISA kan også identificere tidligere og nuværende infektioner. Derfor bruges ELISA ofte som en forskudscreeningstest af lægerne inden en dybdegående analyse af sygdomme. Denne test kan udføres på laboratoriet ved at tage en blodprøve fra patienten. Der er to typer ELISA-test: direkte ELISA og indirekte ELISA. Den vigtigste forskel mellem direkte og indirekte ELISA er den indirekte ELISA er mere følsom og kræver tilsætning af et sekundært antistof mens direkte ELISA er mindre følsom og bruger kun et primært antistof.

INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er direkte ELISA
3. Hvad er indirekte ELISA
4. Sammenligning side ved side - Direkte vs indirekte ELISA
5. Resume

Hvad er direkte ELISA?

ELISA er en sygdomdiagnostisk test udført for at identificere tilstedeværelsen af bestemte antigener eller antistoffer i blodet. Det udføres som en pladeassay. Den bruger antistoffer forbundet med let analyserede enzymer. Antigens tilstedeværelse i serumprøven binder til specifikke antistoffer bundet med enzymer. I det sidste trin tilsættes et specifikt substrat for at reagere med enzymet. Enzymet omdanner underlaget til et farvet eller signalproducerende produkt. Farveændringen i det kemiske underlag afslører tilstedeværelsen af et bestemt antistof i serumprøven. Direkte ELISA-test bruger kun et primært antistof knyttet til enzymet. Efter binding til antigenet ændrer det hurtigt farven, hvilket indikerer tilstedeværelsen af det infektiøse middel i blodet. Imidlertid er intensiteten af signalerne svagere i direkte ELISA, da epitoperne er begrænset til binding af antigenerne. Derfor er direkte ELISA mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA.

Figur 01: Direkte ELISA-test

Hvad er indirekte ELISA?

ELISA kan udføres under anvendelse af to typer antistoffer, nemlig; primært antistof og sekundært antistof. Indirekte ELISA-værktøj bruger begge typer antistoffer til at forstærke signalerne til bedre påvisning. Indirekte ELISA-teknik udføres som følger.

Plader inkuberes med antigener og vaskes for at blokere ikke-specifik binding.
Derefter tilsættes og vaskes primære antistoffer.
Enzymbundet sekundært antistof tilsættes og vaskes.
Et substrat tilsættes og får lov til at reagere med enzymer.
Signaler detekteres, og tilstedeværelsen eller fraværet af det specifikke antigen i prøven identificeres.

I indirekte ELISA-test kan flere sekundære antistoffer binde til et enkelt primært antistof. Sekundære antistoffer er forbundet med let analyserede enzymer. Derfor kan en binding give et stærkt signal på grund af mere end en interaktion. Derfor er indirekte ELISA mere følsomme end direkte ELISA. Imidlertid kan indirekte ELISA give uspecifikke signaler på grund af krydsreaktioner af de sekundære antistoffer.

Figur 02: Indirekte ELISA-test

Hvad er forskellen mellem Direkte og indirekte ELISA?

Direkte vs indirekte ELISA
Direkte ELISA er mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA.	Indirekte ELISA er mere følsomme.
Tid taget
Direkte ELISA-test er en hurtig proces.	Indirekte ELISA er tidskrævende.
Brug af antistoffer
Kun en type antistoffer (Primære antistoffer) anvendes i direkte ELISA.	Primære og sekundære antistoffer anvendes til indirekte ELISA.
Forbindelse med enzymer
Primære antistoffer er forbundet med enzymer.	Sekundære antistoffer er forbundet med enzymer.
Krydsreaktivitet af andet antistof
Direkte ELISA eliminerer krydsreaktiviteten af andre antistoffer.	Indirekte ELISA påvirkes med krydsreaktivitet af andre antistoffer.
Signaler
Signaler er svage sammenlignet med indirekte ELISA.	Signaler amplificeres i indirekte ELISA. Derfor er det let at opdage.

Resume - Direkte vs indirekte ELISA

ELISA er en biokemisk teknik, der hovedsageligt anvendes i immunologi til at detektere tilstedeværelsen af et antistof eller et antigen i en blodprøve fra en patient. Det kan udføres via to processer, der kaldes direkte eller indirekte ELISA. Direkte ELISA-test bruger kun primære antistoffer til at detektere antigenet, mens indirekte ELISA bruger både primære og sekundære antistoffer. I direkte ELISA er primære antistoffer mærket, mens der i indirekte ELISA er mærket sekundære antistoffer. Dette er forskellen mellem direkte og indirekte ELISA.

Referencer
1. ”Den enzymbundne immunosorbentassay (ELISA).” Bulletin fra Verdenssundhedsorganisationen. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29. mar. 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen, og J. Van Der Veen. "Enzymbundet immunosorbentassay, der bruger mærket antigen til påvisning af immunoglobulin M- og A-antistoffer i toxoplasmosis: sammenligning med indirekte immunofluorescens og dobbelt-sandwich-enzymbundet immunosorbentassay." Journal of Clinical Microbiology. U.S. National Library of Medicine, juni 1983. Web. 29. mar. 2017

Billede høflighed:
1. “ELISA diagram” Af Cavitri - Eget arbejde (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. “Indirekte ELISA” af Cawang - Eget arbejde (CC0) via Commons Wikimedia

Videnskab & natur