Forskel mellem GFP og EGFP

Det vigtigste forskel mellem GFP og EGFP er, at GFP er et vildtype-protein inkorporeret i den molekylære kloning af ikke-pattedyrceller, mens EGFP er en forbedret eller konstrueret type GFP, der kan anvendes på pattedyrceller.

Molekylær kloning er en avanceret teknik, som forskere bruger enormt til at udtrykke proteiner via rekombinant teknologi. I rekombinant DNA-teknologi er det nødvendigt at transformere rekombinant vektor med succes til at være vært for organisme. Under transformationsprocessen skal det derfor identificeres og bekræftes, om genet af interesse er blevet transformeret eller ej til værten. For at vurdere dette vedtager molekylærbiologer adskillige teknikker. Ud af disse teknikker er en reportergen. Disse reportergener fungerer som selekterbare markører for at vælge de korrekte transformanter. Det grønne fluorescerende protein (GFP) og det forbedrede grønne fluorescerende protein (EGFP) er således to reporterproteiner, der anvendes til molekylær kloning.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er GFP
3. Hvad er EGFP
4. Ligheder mellem GFP og EGFP
5. Sammenligning side ved side - GFP vs EGFP i tabelform
6. Resume

Hvad er GFP?

GFP er et vildtypeprotein, der indeholder 238 aminosyrerester og adskillige selekterbare regioner af aminosyresekvenser, der adskiller det fra de andre fluorescerende proteiner. Desuden var dette vildtype-protein oprindeligt isoleret fra Aequorea Victoria; en type vandmænd. I naturlige fænomener var vandmændene imidlertid i stand til at producere fluorescens i grøn farve som respons på visse stimuli.

Tidligere overraskede dette koncept forskerne, og de besluttede at bruge det på deres rekombinante DNA-teknologier. Derfor anvendte forskere denne mutante form af vildtypegen som reportergen i deres genekspressionsundersøgelser. Vildtypegenet fra GFP er i stand til at producere et protein, der giver fluorescens ved stuetemperatur eller under UV-lys. Derfor, når det indsættes i transformanterne, udtrykker og producerer det fluorescens. Hvis fluorescensen resulterer efter transformationsprocessen, bekræfter den succes med transformationsprocessen. I enkle ord signaliserer fluorescensemission den vellykkede transformation af den vektor, der bærer genet af interesse ind i værten.

Figur 01: GFP

På grund af denne grund fungerer GFP som en in vivo markør for genekspression. På nuværende tidspunkt anvendes genteknikker til at fremstille GFP. Der er også mange forbedrede versioner af GFP, såsom EGFP, tilgængelige. Derfor muliggør dette effektiv anvendelse af GFP i molekylær kloning og genekspressionsundersøgelser.

Hvad er EGFP?

Forbedret grønt fluorescerende protein eller EGFP er en forbedret version af GFP. Med enkle ord kan vi definere EGFP som en konstrueret version af vildtype GFP. Når vildtypegenet fra GFP muteres, giver det gavnlige virkninger. Derfor tillader det muterede gen fra GFP ekspression af nye karakterer, og som et resultat heraf kan vi producere forbedret GFP med forbedrede egenskaber. Derudover kan vi introducere mutationer med succes i vildtype GFP-genet ved hjælp af bestråling eller kemiske metoder. Disse muterede gener producerer derefter EGFP, som har mere fordelagtige egenskaber.

Figur 02: EGFP

De forbedrede egenskaber ved EGFP er som følger;

• I stand til at udsende stærkere fluorescenssignaler.
• Har høj følsomhed.
• Kan bruge det på pattedyrceller i stedet for prokaryoter og andre eukaryoter på lavere niveau.
• Tilvejebringer også øget renhed af produktet.

I sammenligning med GFP er EGFP derfor det foretrukne valg til genekspressionsundersøgelser. Produktet er dog dyrere sammenlignet med GFP.

Hvad er lighederne mellem GFP og EGFP?

• GFP og EGFP er to proteiner, der har evnen til at udsende grøn farve
• Derfor fungerer begge som reporterproteiner i genekspressionsundersøgelser.
• Det er også muligt at syntetisere begge under anvendelse af rekombinant DNA-teknologi.
• Derudover er det let at mutere disse to typer yderligere for at syntetisere forbedrede former.

Hvad er forskellen mellem GFP og EGFP?

Reportergenet er et gen, der er knyttet til genet af interesse i rekombinant DNA-teknologi. Det signaliserer den vellykkede transformation af den rekombinante vektor til værten. Her er GFP og EGFP to typer grønne fluorescerende proteiner, der fungerer som reporterproteiner. Den vigtigste forskel mellem GFP og EGFP er imidlertid, at GFP er en vildtype, mens EGFP er en konstrueret version af GFP. Desuden har EGFP mere fordelagtige egenskaber end GFP. F.eks. Producerer EGFP stærkere fluorescerende lys og er mere følsom end GFP. En anden forskel mellem GFP og EGFP er de systemer, hvor vi kan bruge disse. Ikke-pattedyrssystemer bruger GFP, mens pattedyrsystemer bruger EGFP.

Nedenstående infografik viser forskellen mellem GFP og EGFP i tabelform.

Resume - GFP vs EGFP

GFP og EGFP er reporterproteiner i molekylær kloning og genekspressionsundersøgelser. GFP er vildtypeproteinet, som er et grønt fluorescerende protein. Proteinet var oprindeligt isoleret fra vandmændene Aequorea victoria. I modsætning hertil er EFGP en forbedret form af GFP-protein. Det er en mutant af vildtypen med forbedrede egenskaber. Derfor har EFGP den højere signalstyrke og højere følsomhed. Derfor kan vi bruge det på pattedyrsvektorer. I modsætning hertil er brugen af ​​GFP hovedsageligt kun på vektorer, der ikke er pattedyr. Overalt er dette forskellen mellem GFP og EGFP.

Reference:

1.Cinelli, RA, et al. "Det forbedrede grøn fluorescerende protein som et værktøj til analyse af proteindynamik og lokalisering: Lokal fluorescensundersøgelse på enkeltmolekylniveau." Photochemistry and Photobiology., U.S. National Library of Medicine, juni 2000. Tilgængelig her  
2. "PDB101: Månedens molekyle: Grønt fluorescerende protein (GFP)." RCSB: PDB-101. Tilgængelig her

Billede høflighed:

1. ”GFP fluorescerende proteinfilm” af Erin Rod - Eget arbejde, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 
2. ”CA2 amigo2 eGFP mus” Af Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Eget arbejde, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia