Forskellen mellem HPLC og HPTLC
Share
Nøgleforskel - HPLC vs HPTLC
Den vigtigste forskel mellem HPLC og HPTLC er den HPLC tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve, mens HPTLC ikke tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve.
Kromatografi er en fysisk separationsmetode, der bruges til at adskille og identificere komponenterne i en blanding. Både HPLC og HPTLC er kromatografiske teknikker. HPLC er højtydende væskekromatografi. HPTLC er højtydende tyndtlagskromatografi.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er HPLC
3. Hvad er HPTLC
4. Sammenligning side ved side - HPLC vs HPTLC i tabelform
5. Resume
Hvad er HPLC?
HPLC er højtydende væskekromatografi. Det er en analytisk teknik, der bruges til at adskille, identificere og kvantificere komponenter i en blanding. Ved denne teknik opløses prøven i et passende opløsningsmiddel. Derefter ledes opløsningsmidlet med prøven gennem en pumpe med et givet tryk. Pumpen er fyldt med fast adsorbentmateriale. Derefter bindes nogle komponenter stærkt til det absorberende materiale, mens andre komponenter binder løst. Dette får komponenterne til at have forskellige strømningshastigheder gennem pumpen. Derfor kan komponenterne let adskilles.
Figur 01: Et HPLC-system
Det adsorberende materiale, der fylder pumpen, er kendt som stationær fase. Opløsningsmidlet med den opløste prøve er kendt som den mobile fase. Pumpen, der bruges i denne teknik, kaldes søjlen. Søjlen er fyldt med et adsorberende materiale, oftest silicapartikler. Størrelsen af disse partikler kan variere fra 2-50 um. Adskillelsesprocessen påvirkes af sammensætningen af den mobile fase og temperaturen i systemet. Interaktionerne mellem den stationære fase og komponenten i prøven kan være hydrofobe interaktioner, dipol-dipol-interaktioner, ionisk binding osv..
HPLC's driftstryk er væsentligt højere end ved traditionel væskekromatografi. Det ligger omkring 50-350 bar. Forskellen mellem væskekromatografi og HPLC er, at i væskekromatografi falder prøven gennem søjlen under tyngdekraft, medens prøven under HPLC trykksættes gennem søjlen. Størrelsen på søjlen og de absorberende partikler er også meget lille sammenlignet med den traditionelle flydende kromatografi. Imidlertid er opløsningen givet ved HPLC-teknikken overlegen.
Hvad er HPTLC?
HPTLC er højtydende tyndtlagskromatografi. Det er den avancerede og automatiserede form for traditionel TLC. Denne teknik giver en effektiv opløsning på kort tid. I denne analysemetode kan prøven og en reference analyseres på samme tid, hvilket gør det muligt at sammenligne prøven med referencen. Det giver en forbedret analytisk nøjagtighed end andre kromatografiske teknikker. Den tid, det tager for analysen, er mindre. Teknikken er en billig teknik.
Figur 02: En analyse af madfarvestoffer ved anvendelse af HPTLC
HPTLC-metoden er en simpel proces, og prøveforberedelsestrinnet elimineres også (I traditionel TLC er prøveforberedelsestrinnet inkluderet før separeringen. Dette trin involverer rengøring og berigelse). Opløsningsmidlet kan anvendes direkte uden nogen forbehandling, skønt andre kromatografiske teknikker kræver forbehandlinger såsom afgasning, filtrering osv..
Det adsorberende materiale, der anvendes i HPTLC, er silica med meget små partikelstørrelser. I traditionel TLC er partikelstørrelsen på silica 5-20 um, mens den i HPTLC er 4-8 um. Prøven påføres HPTLC-pladen ved hjælp af en applikator. Det giver en ensartet og sikker anvendelse. Derefter placeres pladerne i et kammer, der har den mobile fase. Kammeret skal være mættet med dampen fra den mobile fase. Efter HPTLC-processen kan de pletter, der er flyttet, detekteres. Ved detektion af pletterne på pladen bruger HPTLC teknik et passende UV-område eller et jodkammer.
Hvad er forskellen mellem HPLC og HPTLC?
HPLC vs HPTLC | |
| HPLC er højtydende væskekromatografi. | HPTLC er højtydende tyndtlagskromatografi. |
| Teknik | |
| I HPLC ledes den mobile fase med opløsningsmidlet gennem en søjle fyldt med den stationære fase. | I HPTLC bliver prøven plettet på en TLC-plade og anbragt i et kammer, der indeholder den mobile fase; derefter får prøven lov til at migrere opad på pladen sammen med mobilfasen. |
| Måling | |
| I HPLC bruges forskellene mellem strømningshastigheder for komponenter gennem søjlen til at adskille komponenterne i prøven. | I HPTLC bruges forskellene mellem de afstande, som hver komponent i prøven har tilbagelagt, til at adskille komponenterne i prøven. |
| Kvantitativ adskillelse | |
| HPLC tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve. | HPTLC tillader ikke kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve. |
Resume - HPLC vs HPTLC
HPLC og HPTLC er to kromatografiske teknikker. Den vigtigste forskel mellem HPLC og HPTLC er, at HPLC tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve, mens HPTLC ikke tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve.
Reference:
1. "Flydende kromatografi med høj ydeevne." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 10. april 2018, tilgængelig her.
2. "HPTLC." LinkedIn SlideShare, 30. maj 2011, tilgængelig her.
Billede høflighed:
1. "HPTLCplatetoMS" Af Kjaergaard på engelsk Wikipedia - Overført fra en.wikipedia til Commons (Public Domain) via Commons Wikimedia
2. “Hplc” Af PD Dr. rer. Nat. habil. Gertrud Morlock Associeret professor (Privatdozentin) Universitetet i HohenheimInstitutt for fødevarekemi - G. Morlock, C. Oellig, CAMAG Bibliography Service 103 (2009) via Commons Wikimedia
