Forskellen mellem HPLC og UPLC

Det vigtigste forskel mellem HPLC og UPLC er, at HPLC muliggør analyse af partikler, der har deres størrelse på omkring 5 mikrometer, mens UPLC muliggør meget mindre partikler omkring 2 mikrometer.

HPLC og UPLC er begge væskekromatografiske teknikker, der er nyttige til at adskille komponenterne af en forbindelse. For at kende forskellen mellem HPLC og UPLC, skal vi først vide, hvad HPLC er. Dette skyldes, at UPLC er en speciel version af HPLC, og vi kan let forstå det, hvis vi ved, hvad HPLC er.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er HPLC
3. Hvad er UPLC
4. Sammenligning side ved side - HPLC vs UPLC i tabelform
5. Resume

Hvad er HPLC?

Udtrykket HPLC står for High Performance Flydende kromatografi. Det er en teknik, som vi kan bruge til at adskille forskellige bestanddele af en forbindelse. Det er også den mest anvendte teknik til at identificere, kvantificere og adskille komponenter af en blanding. Desuden bruger denne teknik et højt tryk til at skubbe opløsningsmidler gennem søjlen. Endvidere er de vigtigste anvendelser af HPLC i biokemi til analyse af bestanddele af en forbindelse. Det er en ideel måde til adskillelse og identifikation af aminosyrer, nukleinsyrer, proteiner, kulbrinter, pesticider, kulhydrater, antibiotika, steroider og utallige andre uorganiske stoffer.

Figur 01: HPLC-system i et laboratorium

Kort sagt er fremgangsmåden til drift af HPLC-teknikken som følger. For det første bør vi indføre prøven i strømmen af ​​mobilfase i adskilte små mængder ved hjælp af en pumpe. Pumpetrykket skal holdes på 40 MPa. Derefter kolonner denne strøm af mobil fase gennem kolonnen af ​​HPLC. Komponenterne i prøven passerer også gennem kolonnen. Deres bevægelseshastigheder er dog forskellige fra hinanden. Denne forskel opstår på grund af forskellen i interaktioner mellem prøvekomponenterne og adsorbenten inde i søjlen. Vi kalder dette adsorbent som den stationære fase, fordi det befinder sig inde i søjlen (ikke bevæger sig). For det andet kan vi i slutningen af ​​søjlen samle den prøve, der eluerer fra søjlen. Der kan vi bestemme forskellene i retentionstider for hver komponent i prøven.

Hvad er UPLC?

Udtrykket UPLC står for Ultrahøjtydende flydende kromatografi. Det er en variation af HPLC, men fremgangsmåden er den samme. I modsætning til HPLC giver denne metode imidlertid mulighed for at analysere meget små partikler, såsom 2 mikrometer små partikler.

Figur 02: En UPLC-enhed

Desuden giver det en hurtigere analyse. I denne teknik bruger vi et 100 MPa pumpetryk til indsætning af prøven i søjlen. Derfor bekræfter dette høje tryk, at hele prøven indføres i søjlen. Dette er således meget effektivt sammenlignet med HPLC.

Hvad er forskellen mellem HPLC og UPLC?

Udtrykket HPLC står for High Performance Liquid Chromatography, mens udtrykket UPLC står for Ultra High Performance Liquid Chromatography. Derfor er UPLC-teknikken en udviklet version af HPLC. Således er driftsmetoden den samme for begge teknikker. UPLC er imidlertid mere effektiv sammenlignet med HPLC, fordi den bruger et højt pumpetryk; pumpetrykket for HPLC er 40 MPA, mens det er 100 MPa for UPLC. Derfor er dette en forskel mellem HPLC og UPLC. Frem for alt er nøgleforskellen mellem HPLC og UPLC, at HPLC muliggør analyse af partikler med deres størrelse på omkring 5 mikrometer, mens UPLC muliggør meget mindre partikler omkring 2 mikrometer.

Resume - HPLC vs UPLC

UPLC er en form for HPLC. Driftsmetoderne er således de samme. Men vi kan finde nogle forbedrede funktioner i UPLC sammenlignet med HPLC. Derfor er der nogen forskel mellem HPLC og UPLC. Den vigtigste forskel mellem HPLC og UPLC er imidlertid, at HPLC muliggør analyse af partikler med deres størrelse på omkring 5 mikrometer, mens UPLC muliggør meget mindre partikler på omkring 2 mikrometer.

Reference:

1. "Flydende kromatografi med høj ydeevne." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20. oktober 2018. Tilgængelig her
2. “UPLC.” Wikipedia, Wikimedia Foundation, 25. oktober 2017. Tilgængelig her  

Billede høflighed:

1. ”Hplc” Af Kjaergaard på engelsk Wikipedia (Public Domain) via Commons Wikimedia 
2. ”Billede af en UPLC-enhed” af Groep29 BFW - Eget arbejde, (Public Domain) via Commons Wikimedia