Forskel mellem immunfluorescens og immunohistokemi

Nøgleforskel - immunfluorescens vs immunohistokemi
 

Sygdomsdiagnostik, der anvender molekylærbiologiske metoder, er blevet et voksende område inden for den kliniske laboratorieteknologi. Det inkluderer alle test og metoder til at identificere en sygdom og forstå årsagen til en sygdom ved at analysere DNA, RNA eller udtrykte proteiner i en organisme. Hurtige fremskridt inden for molekylær diagnostik har muliggjort grundlæggende undersøgelser af overførbare og ikke-overførbare sygdomme. Disse bruges til at bestemme ændringer i sekvens- eller ekspressionsniveauer i afgørende gener eller proteiner involveret i sygdom. Immunfluorescens (IF) og immunohistokemi (IHC) er to så vidt anvendte teknikker inden for kræftbiologi. IF er en type IHC, hvor en fluorescensdetektionsmetode anvendes til analyse af monoklonale og polyklonale antistoffer, medens IHC bruger kemiske baserede metoder til at detektere de monoklonale og polyklonale antistoffer. Dette er den vigtigste forskel mellem IF og IHC.

INDHOLD

1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er immunfluorescens 
3. Hvad er immunohistokemi
4. Ligheder mellem immunfluorescens og immunohistokemi
5. Sammenligning side ved side - immunfluorescens vs immunohistokemi i tabelform
6. Resume

Hvad er immunfluorescens (IF)?

Immunofluorescens er en detektionsteknik, hvor antistofferne anvendt i assayet mærkes under anvendelse af fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende proteiner til detekteringsformålet. Mærkede sekundære antistoffer kan resultere i uønskede baggrundssignaler; derfor er IF-teknik baseret på mærkning af det primære antistof i øjeblikket for at undgå uønskede signaler under påvisning. Gennem denne teknik forhindres ikke-specifik binding mellem det primære og det sekundære antistof, og det er hurtigere, da der ikke er involveret et sekundært inkubationstrin. Datakvaliteten forbedres også.

Figur 01: Dobbelt immunofluorescensfarvning for BrdU, NeuN og GFAP

Fluorokromer eller fluorescerende farvestoffer er forbindelser, der kan absorbere stråling, fortrinsvis ultraviolet stråling, der er ophidset. Når partiklerne når jordtilstanden fra den ophidsede tilstand, udsender de stråling, der fanges og detekteres af en detektor for at danne et spektrum. Det er meget vigtigt, at den fluorescerende mærkning er kompatibel og stabil til den særlige reaktion, og at den skal konjugeres korrekt til antistoffet for at opnå nøjagtige resultater. En af de mest anvendte fluorokromer er fluoresceinisothiocyanat (FITC), der er i grøn farve, med absorptions- og emissionstop bølgelængder på henholdsvis 490 nm og 520 nm. Rhodamine, et andet middel anvendt i IF, er rød i farve og har distinkt absorption og emissionstop bølgelængder på 553 nm og 627 nm.

Hvad er immunhistokemi (IHC)?

IHC er en molekylær testmetode, der anvendes til at identificere og bekræfte tilstedeværelsen af ​​antigenet i målcellen. Målcellen kan være en infektiøs partikel, et mikrobielt patogen eller en ondartet tumorcelle. IHC anvender monoklonale og polyklonale antistoffer til at bestemme tilstedeværelsen af ​​antigener til stede på celleoverfladen af ​​målcellerne. Teknikken er baseret på antigen-antistofbinding. En detektionsmarkør konjugeres til disse antistoffer for at detektere tilstedeværelsen eller fraværet af det bestemte antigen. Disse markører kan være kemiske markører, såsom enzymer, fluorescerende mærkede antistoffer eller radiomærkede antistoffer.

Figur 02: Mus-hjerne-skive farvet af immunohistokemi

Den mest populære anvendelse af IHC er inden for kræftcellebiologi til at identificere tilstedeværelsen af ​​ondartede tumorer, men det bruges også til påvisning af infektionssygdomme.

Hvad er ligheden mellem immunfluorescens og immunohistokemi?

• Immunofluorescens og immunohistokemi foregår under in vitro-forhold.
• Begge teknikker er baseret på antigen-antistoffet
• Begge er meget hurtige teknikker.
• Resultaterne af teknikkerne er reproducerbare.
• Begge har forbedret datakvalitet.
• Disse teknikker, der anvendes til diagnosticering af kræft og infektionssygdomme.

Hvad er forskellen mellem immunfluorescens og immunohistokemi?

Immunfluorescens vs immunohistokemi
IF er en detektionsteknik, hvor antistofferne anvendt i assayet er mærket under anvendelse af fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende proteiner til påvisning.	IHC er en detektionsteknik, hvor antistofferne anvendt i assayet er mærket ved hjælp af kemikalier eller radioaktive elementer til påvisning.
Nøjagtighed
Nøjagtigheden er højere i IF-teknik sammenlignet med IHC.	Nøjagtigheden er lavere i IHC.
Specificitet
IF er mere specifikt.	IHC er mindre specifikt.

Sammendrag - Immunofluorescens vs Immunohistokemi

Molekylære mekanismer har medført mange ændringer inden for medicinområdet, hvilket har ført til avancerede molekylære testmetoder, der har medført revolutioner inden for diagnostikområdet. Disse opfindelser har ført til en hurtig og nøjagtig identifikation og bekræftelse af sygdommen, hvilket muliggør en vellykket administration og produktion af medikamenter. Disse teknikker anvendes også i farmakologi til at finde lægemiddelsmål og til at bekræfte lægemidlets farmakokinetiske egenskaber under lægemiddelmetabolisme. IF og IHC er to diagnostiske metoder, der er baseret på begrebet antigen- og antistofbinding, selvom detekteringsmåden i begge teknikker er forskellige. IF bruger princippet om fluorescens til at detektere antigenet, og IHC bruger begrebet kemisk konjugering til at detektere antigenet. Dette er forskellen mellem IF og IHC.

Download PDF-version af immunfluorescens vs immunohistokemi

Du kan downloade PDF-version af denne artikel og bruge den til offline-formål som pr. Citatnotat. Download PDF-version her Forskel mellem immunfluorescens og immunohistokemi.

Referencer:

1. Aoki, Valéria, et al. “Direkte og indirekte immunfluorescens.” Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, tilgængelig her. Åbnede 25. august 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Anvendelser af immunohistokemi." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, Aug. 2012, tilgængelig her. Åbnede 25. august 2017.

Billede høflighed:

1. “Dobbelt immunfluorescensfarvning for BrdU, NeuN og GFAP” af Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Intranasal levering af transformerende vækstfaktor- beta1 hos mus efter slagtilfælde reducerer infarktvolumen og øger neurogenesen i den subventrikulære zone; PMID 19077183 (CC BY 2.0) via Commons Wikimedia
2. “Hypothalamus af et musevæv farvet af ABC-immunohistokemi” Af zabbn - Eget arbejde (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia