Forskel mellem nitrocellulose og nylonmembran

Nøgleforskel - Nitrocellulose vs Nylon membran
 

Blotting er en vigtig teknik til påvisning af specifikke sekvenser af DNA, RNA og proteiner fra deres blandinger i molekylærbiologi. Det gøres ved hjælp af en membran, der kaldes blot. Der er forskellige blotting teknikker såsom nordlige, sydlige og vestlige blotting. Valg af en passende membran til blotting-processen skal udføres omhyggeligt for at forhindre ikke-specifik binding og forkerte detektioner. Nitrocellulose, nylon og PVDF er almindeligt anvendte membraner i blotting teknikker. De har forskellige egenskaber. Den vigtigste forskel mellem nitrocellulose og nylonmembran er den nitrocellulosemembraner har et højt proteinimmobiliseringspotentiale hvorimod nylonmembraner har et højt nukleinsyreimmobiliseringspotentiale. Imidlertid anvendes begge typer membraner ofte i blotting-teknikker.

INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er en nitrocellulosemembran
3. Hvad er en nylonmembran
4. Sammenligning side ved side-nitrocellulose vs nylonmembran
5. Resume

Hvad er en nitrocellulosemembran?

Nitrocellulosemembran er et almindeligt anvendt membranfilter i nukleinsyre- og proteinblottingteknikker. Det har et højt proteinbindingspotentiale. Derfor er nitrocellulosemembraner vidt brugt i western blotting-teknik. Nitrocellulosemembraner er kompatible med alle hybridiseringsteknikker og udviser overlegen bindingskapacitet uden interferens. Nitrocellulosemembraner er naturligt hydrofile. De laver hydrofil interaktion med molekyler og immobiliserer dem effektivt på membranen. Kommercielle nitrocellulosemembraner fås i to porestørrelser: 0,45 og 0,2 um.

Figur 01: Nitrocellulosemembran anvendt i western blotting

Hvad er en Nylonmembran?

Nylonmembran er en anden type kommerciel membran, der anvendes til blotting-teknikker. Det bruges alternativt sammen med nitrocellulosemembraner til sydlig og nordlig blotting. Nylonmembraner er ideelle til sydlig blotting end nitrocellulose på grund af deres høje affinitet til binding med DNA. På grund af adskillige unikke træk ved nylonmembraner bruger forskere ofte nylonmembraner til sydlig og nordlig blotting i stedet for over nitrocellulosemembran. Nylonmembraner anbefales også til stripping og reprobing i modsætning til nitrocellulose.

Figur 02: Nylonmembran brugt til sydlig blotting

Hvad er forskellen mellem Nitrocellulose og Nylon Membrane?

Nitrocellulose vs Nylon membran
Nitrocellulosemembraner er sprøde.	Nylonmembraner er mindre sprøde.
håndtering
De er vanskelige at håndtere.	De er lette at håndtere.
Fornyet probing
Ikke-understøttede nitrocellulosemembraner er svære at genskabe.	Genoptagelse er let med nylonmembraner.
Kompatibilitet med forskellige opbevaringsbetingelser
Nitrocellulosemembraner har mindre styrke til at modstå forskellige opbevaringsbetingelser.	Nylonmembraner reagerer mere robust på forskellige opbevaringsbetingelser.
Brug
Prewetting er påkrævet.	Prewetting er ikke påkrævet for nylonmembraner.
Hydrofil natur
Nitrocellulosemembraner er hydrofile i naturen, men er mindre hydrofile end nylonmembraner.	De er meget hydrofile i naturen.
Immobiliseringspotentiale
Nitrocellulosemembraner har mindre affinitet for nukleinsyrer. Men det har en høj affinitet for proteiner.	Nylonmembraner har et højt bindingspotentiale med nukleinsyrer end nitrocellulosemembraner.

Resume - Nitrocellulose vs Nylon Membrane

Nitrocellulose- og nylonmembraner er specielle lag, der anvendes til blotting-teknik til at gengive båndmønsteret på gelen. De muliggør muligheden for at detektere en specifik sekvens eller et protein fra blandingerne ved at immobilisere dem på membranen. Når molekylerne er immobiliseret på membranen, kan de anvendes som et substrat til hybridiseringsanalyse med mærkede prober. Nitrocellulosemembran anvendes ofte til proteindetektion i western blotting-teknik på grund af dens høje bindingsaffinitet med proteiner. Nylonmembraner bruges ofte til sydlig og nordlig blotting. Dette er forskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran.

Referencer:
1. Hayes, P. C., C. R. Wolf og J. D. Hayes. ”Blottingsteknikker til undersøgelse af DNA, RNA og proteiner.” BMJ: British Medical Journal. U.S. National Library of Medicine, 14. oktober 1989. Web. 7. april 2017
2. Mahmood, Tahrin og Ping-Chang Yang. “Western Blot: Teknik, teori og fejlfinding.” North American Journal of Medical Sciences. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, september 2012. Web. 7. april 2017

Billede høflighed:
1. “Western blot transfer” Af Bensaccount på engelsk Wikipedia (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia