Forskellen mellem SDS-side og Western Blot

Nøgleforskel - SDS-side vs Western Blot
 

Western blotting er en teknik, der detekterer et specifikt protein fra en proteinprøve. Denne teknik udføres via flere nøgletrin: gelelektroforese, blotting og hybridisering. Natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-side) er en slags gelelektroforeseteknik, der bruges til at adskille proteiner i henhold til deres størrelse (molekylvægt). Western blot er et specielt ark med en blottingmembran, der bruges til at overføre det samme mønster af proteinerne i SDS-siden. Den vigtigste forskel mellem SDS Page og western blot er den SDS-side tillader adskillelse af proteiner i en blanding mens western blot muliggør detektion og kvantificering af et specifikt protein fra en blanding. Begge er nyttige i proteinanalysestudier.

INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er SDS-side
3. Hvad er Western Blot
4. Sammenligning side ved side - SDS-side vs Western Blot
5. Resume

Hvad er SDS-side?

SDS Page er en gelelektroforese-teknik, der bruges til proteinseparation. Det bruges ofte inden for biokemi, genetik, kriminalteknologi og molekylærbiologi. Når proteinerne er ekstraheret fra prøven, køres de på en gel bestående af SDS og polyacrylamid. SDS er et anionisk detergent, der bruges til at linearisere proteiner (denaturproteiner) og til at overføre en negativ ladning til lineariserede proteiner, der er proportional med deres molekylære masse. Polyacrylamid bliver den faste bærer til gelen. Denaturerede proteiner, som er negativt ladede, migrerer mod den positive ende af apparatet gennem gelen. I henhold til størrelserne på proteinerne varierer migrationshastigheden mellem proteiner, og der sker adskillelse. Derfor er SDS-siden nyttig til separering af individuelle proteiner baseret på deres størrelser.

Fremstillingen af ​​polyacrylamidgelen til fraktionering af proteiner er et vigtigt trin i SDS Side. Den korrekte koncentration af polyacrylamid og typen af ​​det anvendte tværbindingsmiddel påvirker gelsens fysiske egenskaber stærkt, hvilket gør den faktiske adskillelse af de forskellige proteiner. Gelens porestørrelser skal styres korrekt for effektiv adskillelse. SDS Page betragtes dog som en proteinseparationsteknik med høj opløsning.

SDS Page-teknik har en stor begrænsning i proteinanalyse. Da SDS denaturerer proteiner inden adskillelse, tillader det ikke påvisning af enzymatisk aktivitet, proteinbindingsinteraktioner, proteinkofaktorer osv..

Figur 01: SDS-side

Hvad er Western Blot?

Western blotting-teknik muliggør detektion af et specifikt protein fra en proteinblanding og måling af proteinets mængde og molekylvægt. Western blot er den membran, der bruges under blottingproceduren til at få spejlbillede af proteinmønstrene i SDS-polyacrylamidgelen. Membranen, der bruges til westernblotting, består for det meste af nitrocellulose eller polyvinyliden-difluorid (PVDF). Membranen med det overførte protein kan bruges til at identificere det ønskede protein. Det kræver antistof af høj kvalitet til påvisning af det ønskede protein ved hybridisering. Antistoffet binder til dets specifikke antigen og afslører tilstedeværelsen af ​​det ønskede antigen, som er et protein.

Overførsel af proteinerne fra SDS polyacrylamidgel til den vestlige blot udføres ved elektroblotting. Det er en effektiv og hurtig metode, der får proteinerne til at elektroforese ud af gelen og passere over på nitrocellulosemembranen (western blot).

Figur 02: Western Blot

Hvad er forskellen mellem SDS Page og Western Blot?

SDS-side vs Western Blot
SDS Page er en gelelektroforeseteknik.	Western blot er en teknik, der udføres på en membran til at detektere et specifikt protein fra en blanding.
Brug
SDS-side tillader adskillelse af proteiner i henhold til deres størrelse.	Western blot tillader overførsel af proteiner på SDS-sidegelen uden at ændre dets mønster og tillader hybridisering med specifikke antistoffer.
Ulemper
Proteindenaturering, høje omkostninger og tilstedeværelse af neurotoksinkemikalier er ulemperne ved denne teknik.	Denne teknik er tidskrævende og kræver en god oplevelse af personlige og specifikke kontrollerede forhold.

Resume - SDS Side vs Western Blot

SDS-side og western blot er to metoder involveret i proteinanalyse. SDS-side muliggør nem adskillelse af proteiner på en gel i henhold til deres molekylvægt. Western blot hjælper med at bekræfte tilstedeværelsen og mængden af ​​et specifikt protein gennem hybridisering med specifikke antistoffer. Dette er forskellen mellem SDS Page og western blot.

Referencer:
1. Blancher, C. og A. Jones. “SDS -PAGE og Western Blotting Techniques.” Metoder i molekylær medicin. U.S. National Library of Medicine, n.d. Web. 27. mar. 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig og David H. Petering. "Indfødt SDS-PAGE: Elektroforetisk separering af proteiner med høj opløsning med opretholdelse af indfødte egenskaber inklusive bundne metalioner." Metallomik: integreret biometalvidenskab. U.S. National Library of Medicine, maj 2014. Web. 27. mar. 2017.

Billede høflighed:
1. “SDS-PAGE Electrophoresis” Af Bensaccount på engelsk Wikipedia (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. “Western blot 114A” Af Amanthabagdon - Eget arbejde (Public Domain) via Commons Wikimedia