Forskel mellem PCR og realtid PCR

PCR vs realtid PCR

PCR- eller polymerase-kædereaktion er en revolutioneret opdagelse inden for moderne molekylærbiologi, som først blev udviklet af kemikeren Kary Mullis i 1983. Den tillader, at en enkelt sekvens i et komplekst DNA amplificeres til analyse. Den grundlæggende idé ved PCR er, at to primere, der er komplementære til de modsatte strenge af en DNA-sekvens, er orienteret mod hinanden; primerne producerer komplementære strenge, der hver indeholder den anden primer. Derfor er resultatet en stor mængde af en sekvens, der svarer til det DNA, der ligger mellem de to primere. DNA-polymeraseenzym anvendes til at udvide primerne i PCR. DNA-polymerase er et termostabilt enzym, og det har evnen til at overleve i høje temperaturer (94 til 95 ° C), der bruges til denaturering af skabelon-DNA.

PCR involverer tre trin, nemlig gentagne runder med denaturering, udglødning af primere og syntese af DNA. En termocykelmaskine bruges til at udføre denne reaktion, så den kan programmeres til at ændre temperaturerne hurtigt og nøjagtigt. Anvendelser af PCR er kriminelle undersøgelser, DNA-fingeraftryk, påvisning af patogener og analyse af DNA fra tidlige humane arter.

Hvad er konventionel PCR?

Der er tre hovedstadier i konventionel PCR, nemlig; DNA-amplifikationstrin, adskillelse af PCR og påvisning af produkter. Adskillelse af DNA-segmenter udføres typisk ved agarosegelelektroforese. Produkterne farves derefter med etheiduimbromid. Endelig opnås detektion ved visualisering af bånd på geler under UV-lys. Derfor udtrykkes de endelige resultater af konventionel PCR ikke som tal. Normalt er den konventionelle PCR kun i stand til at detektere en enkelt parameter.

Hvad er PCR i realtid?

PCR i realtid kan detektere amplificering af produkter, da produkterne syntetiseres. Med udviklingen af ​​teknologi er PCR blevet en meget populær teknik, især til påvisning og identifikation af bakterier i fødevarer. PCR i realtid bruger et lysstofrøresystem og termocykler udstyret med fluorescerende detekteringsevne.

Hvad er forskellen mellem konventionel PCR og realtid PCR?

• Konventionel PCR er mere tidskrævende, da den bruger gelelektroforese til at analysere de forstærkede PCR-produkter. I modsætning hertil er PCR i realtid mindre tidskrævende, da det kan registrere amplifikationer i de tidlige faser af reaktionen.

• PCR i realtid indsamler data i den eksponentielle vækstfase af PCR, mens traditionel PCR indsamler data ved slutpunktet af reaktionen.

• Slutpunkteresultaterne for den konventionelle PCR er muligvis ikke meget præcise, men resultaterne af realtids-PCR er meget præcise.

• PCR i realtid er mere følsom end konventionel PCR.

• Konventionel PCR har meget dårlig opløsning, mens PCR i realtid kan registrere meget lidt ændringer på grund af den høje opløsning.

• Slutpunktdetektion af konventionel PCR har kort dynamisk rækkevidde, mens realtids PCR-detektion har et bredt dynamisk interval.

• I modsætning til konventionel PCR findes automatiserede detektionsteknikker i realtid PCR.

• Konventionel PCR er meget sofistikeret og arbejdskrævende mere end realtids PCR.

• I modsætning til realtids-PCR kan konventionel PCR ikke skelne mellem døde og levende bakterier.

• PCR i realtid bruger fluorescerende farvestofsystem til at detektere produkterne, mens konventionel PCR bruger ethidiumbromid og UV-lys til at visualisere bånd i agarosegelemediet.