Forskellen mellem stabling gel og separerende gel
Share
Nøgleforskel - Stacking Gel vs Separating gel
Udtrykkene stabling gel og separerende gel bruges til at forklare SDS-PAGE teknikken. SDS-PAGE eller natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese er en laboratorieteknik, der bruges til at adskille proteinmolekyler baseret på deres molekylvægte. Teorien bag teknikken er, at proteiner med forskellige molekylvægte viser forskellige migrationshastigheder; molekyler med lav molekylvægt migrerer hurtigere, mens molekyler med høj molekylvægt migrerer langsomt. Mediet til migration er en gel. Der er to typer geler kaldet stabelgel og separeringsgel. Det vigtigste forskel mellem stabling af gel og separerende gel er det pH-værdien af stablingsgelen er 6,8, medens pH for den separerende gel er 8,8.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er Stacking Gel
3. Hvad er separerende gel
4. Forholdet mellem Stacking Gel og Separating Gel
5. Sammenligning side ved side - Stacking Gel vs Separerende gel i tabelform
6. Resume
Hvad er Stacking Gel?
Stabelgel er en lavkoncentreret polyacrylamidgel, der anbringes på toppen af mere koncentreret opløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik. Stabelgelen bruges til at forbedre opløsningen af elektroforese. Opløsningen øges på grund af forskellen mellem koncentrationer af stablingsgel og opløsende gel, der påvirker proteinerne i prøven. Da koncentrationen af polyacrylamid i stablingsgel er lav, er porestørrelsen højere. Dette hjælper også med at øge adskillelsen.
Stabelgelen er en løs polyacrylamidgel med store porer på ca. 7% polyacrylamid. Disse porer fungerer ikke som en betydelig barriere for store proteinmolekyler. Derfor påvirker denne gel lidt på mobiliteten af disse proteiner. Dette gør adskillelse i overensstemmelse med proteinets mobilitet og størrelse ved at koncentrere dem i mellem to geler.
Figur 01: SDS-PAGE Acrylamide Gel
PH-værdien af stablingsgelen er 6,8. Dets pH er surt end det, der opløses gel med 2 pH-enheder. Denne pH indebærer en lavere ionstyrke og dermed en højere elektrisk modstand. Dette provokerer mobiliteten af proteiner end andre ladede partikler, der er til stede i gelen.
Hvad er separerende gel?
Separerende gel eller opløsende gel af en SDS-PAGEtechnique er en stærkt koncentreret polyacrylamidgel, der placeres på toppen af lavkoncentreret stablingsgel. Den separerende gel indeholder en høj mængde polyacrylamid (10%). PH-værdien af denne gel opretholdes som pH = 8,8, hvilket er et højere pH-niveau end niveauet for stablingsgelen.
Figur 02: Et gelelektroforeseapparat
Når proteinmolekylerne når den separerende gel, bremses migrationen af disse molekyler, fordi den separerende gel er en høj koncentrationsgel med en lille porestørrelse, der kan fungere som en betydelig barriere for bevægelsen af proteinmolekylerne. Denne afmatning tillader, at de andre proteiner migrerer langsomt for at indhente, hvilket resulterer i et smalt, koncentreret bånd mellem de to geler.
Hvad er forholdet mellem Stacking Gel og Separating Gel?
- Både Stacking Gel- og Separating Gel-typer anvendes i det samme apparat.
Hvad er forskellen mellem stabling gel og separerende gel?
Stacking Gel vs Separating Gel | |
| Stabelgel er en lavkoncentreret polyacrylamidgel, der anbringes på toppen af mere koncentreret opløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik. | Separerende gel eller opløsende gel i en SDS-PAGE-teknik er en stærkt koncentreret polyacrylamidgel, der placeres på toppen af en lavkoncentreret stablingsgel. |
| Placering | |
| Stabelgel anbringes på den opløsende (separerende) gel. | Separerende gel anbringes på bunden af beholderen, der bruges til gelelektroforese. |
| Koncentration | |
| Koncentrationen af stablingsgel er høj. | Koncentrationen af separerende gel er lav. |
| Polyacrylamid indhold | |
| Stabelgel indeholder ca. 7% polyacrylamid. | Separerende gel indeholder ca. 10% polyacrylamid. |
| pH | |
| PH-værdien af stablingsgelen er 6,8. | PH-værdien for den separerende gel er 8,8. |
| Porestørrelse | |
| Store porestørrelser er til stede i stablingsgel. | Små porestørrelser er til stede i separeringsgel. |
| Løsning | |
| Stabelgel giver bedre opløsning. | Separerende gel giver en dårlig opløsning. |
Resumé - Stacking Gel vs Separering gel
Stabelgel og separeringsgel er to typer polyacrylamidgeler, der bruges til at opnå bedre adskillelse af proteinmolekyler i en given prøve. Forskellen mellem stablingsgel og separeringsgel er, at pH-værdien for stablingsgelen er 6,8, medens pH-værdien for separeringsgelen er 8,8.
Reference:
1. "Polyacrylamidgelelektroforese." Polyacrylamidgelelektroforese (teori): Molekylærbiologi Virtuel lab II: Bioteknologi og biomedicinsk teknik: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Tilgængelig her
2. "Sådan fungerer SDS-PAGE." Bitesize Bio, 16. februar 2018. Tilgængelig her
3. "SDS-PAGE stablingsgel - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew)." Google-websteder. Tilgængelig her
Billede høflighed:
1.'SDS-PAGE Acrylamide gel'By Bensaccount på engelsk Wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. 'Gelelektroforeseapparat' Af Jeffrey M. Vinocur - Eget arbejde, (CC-BY 2.5) via Commons Wikimedia
